操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
注:本公司提供試劑盒免費代測服務。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。本公司產品僅用于科研實驗。
產品名稱:白介素受體相關激酶試劑盒
產品貨號:BJ-100396
規格:48T/96T
主要成分:酶標板,試劑,標準品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等標本..
組成:
48孔配制:
1.說明書: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1個
4 酶標包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標準品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 產品名稱說明書:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1個
4. 酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復: 根據抗體說明書推薦方法進行抗原修復,常采用高壓、微波(溫
度達到 98~100℃)或酶消化修復法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復,
直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復染:自來水充分沖洗,復染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準
鷹嘴豆芽素ABiochanin A (≥98%,HPLC)491-80-520MG
10-羥基喜樹堿10-Hydroxycamptothecin (≥98%,HPLC)67656-30-820MG
可可堿Theobromine (,≥98%,HPLC)83-67-020MG
D-松醇D-Pinitol (≥98%,HPLC)10284-63-620MG
常春藤皂苷元Hederagenin (≥98%,HPLC)465-99-620MG
花椒8-Methoxypsoralen (≥98%,HPLC)298-81-720MG
白花前胡醇Peucedanol (≥98%,HPLC)28095-18-320MG
佛手柑內酯;香柑內...5-Methoxypsoralen (≥98%,HPLC)484-20-820MG
肉堿L-Carnitine inner salt (≥98%,HPLC)541-15-120MG
氯化矢車菊素; 花青素Cyanidin Chloride (≥98%,HPLC)528-58-55MG
乙酸銨Ammonium Acetate (98%)631-61-8250G
酵母聚糖AZymosan A58856-93-2250MG
白介素受體相關激酶試劑盒Adiponectin Receptor 1 脂聯素受體1抗體 0.2ml
Fast skeletal Myosin/MRLC2 骨骼肌肌球蛋白輕鏈2抗體 規格: 0.1ml
FSTL5 卵泡抑素相關蛋白5抗體 規格: 0.2ml
DDX4/MVH DDX4抗體 規格: 0.1ml
phospho-MAP4(Ser1073) 磷酸化微管相關蛋白4抗體 規格: 0.1ml
Phospho-CDK2 (Thr14) 磷酸化周期素依賴性激酶2抗體 規格: 0.1ml
GADD153/CHOP/DDIT3 GADD153抗體 規格: 0.1ml
TSPAN15/NET-7 四分子交聯體15抗體(四旋蛋白) 規格: 0.2ml
PCB 丙酮酸羧化酶抗體 規格: 0.2ml
SKP1 S期激酶相關蛋白1抗體 規格: 0.2ml
P53(wt-p53) (D2F7) 瘤抑制基因野生型P53單抗 規格: 0.1ml
IKK alpha/IkappaB kinase KB抑制蛋白激酶α抗體 規格: 0.1ml
EPHX2 胞漿環氧化物水解酶抗體 規格: 0.2ml
NDRG1/Cap43 分化相關基因NDRG1抗體 規格: 0.1ml