產品名稱：小鼠肝實質細胞

產品名稱：小鼠肝實質細胞

產品英文：AML-12

細胞培養條件：D/F12+10%FBS+1%ITS（10ug/mL胰島素；轉鐵蛋白5.5ug/mL; 5ng/mL硒）+40ng/ml地塞米松+1%P/S

生長狀態：貼壁生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫

實驗要點及說明 :

1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應該為玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 

4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率； 

5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

培養操作:

1）復蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜（或將 細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養基，培養過夜）。天換液并 檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養。      

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養液后吹勻。

4. 將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細胞凍存時，棄去培養基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養基終止消化，可使用血球計數板計數。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據細胞數量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍 存管做好標識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

使用方法：

收到細胞后，請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩定細胞狀態。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基，用PBS清洗細胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當的比例進行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養箱中培養；

4) 待細胞完全貼壁后，培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養基。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

哥倫比亞瓊脂對照培養基 The control Columbia agar culture medium 13.2g/300ml 負20℃，避光

綠膿菌素測定用對照培養基基礎 Pyocyanin determined by contrast medium base 13.9g/300ml 負20℃，避光

顯色對照培養基 Candida color contrast medium 4.8g/100ml 負20℃，避光

沙氏葡萄糖瓊脂對照培養基 Sabouraud dextrose agar control medium 19.5g/300ml 負20℃，避光

沙門、志賀菌屬瓊脂對照培養基 Salmonella, Shigella Agar control medium 18.0g/300ml 負20℃，避光

麥康凱瓊脂對照培養基 Mark Kang Kai agar control medium 15.6g/100ml 負20℃，避光

款冬酮 Kuan Dongtong 20mg 負20℃，避光

甘露醇氯化鈉瓊脂對照培養基 Mannitol and sodium chloride agar control medium 33.3g/300ml 負20℃，避光

膽鹽乳糖對照培養基 Lactose bile control medium 3.6g/100ml 負20℃，避光

玫瑰紅鈉瓊脂對照培養基 Rose bengal sodium agar control medium 9.0g/300mL 負20℃，避光

營養肉湯對照培養基 Nutrient broth control medium 1.8g/100mL 負20℃，避光

改良馬丁對照培養基 Modified Martin control medium 11.6g/400mL 負20℃，避光

硫乙醇酸鹽流體對照培養基 Fluid thioglycollate control medium 11.9g/400mL 負20℃，避光

頭孢曲松雜質C Ceftriaxone impurity C 50mg 負20℃，避光

反式頭孢曲松 Trans of Qu Song 50mg 負20℃，避光

阿奇霉素雜質J Azithromycin impurity J 50mg 負20℃，避光

青霉胺二硫化物 Penicillamine two sulfide 30mg/支 負20℃，避光

頭孢噻肟系統適用性對照品 Cefotaxime system suitability control products 30mg 負20℃，避光

氨芐西林系統適用性對照品 Ampicillin system suitability control products 30mg 負20℃，避光

頭孢哌酮雜質C Cefoperazone impurity C 100mg 負20℃，避光

（左）氧氟沙星雜質E (left) ofloxacin impurity E 50mg 負20℃，避光

鉤端螺旋體(Lep)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

豬內源性逆轉錄病毒(PERV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬內源性逆轉錄病毒(PERV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

豬內源性逆轉錄病毒前病毒(PERV-pre)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬內源性逆轉錄病毒前病毒(PERV-pre)核酸檢測試劑盒 48T

豬鏈球菌通用型(SS-U)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬鏈球菌通用型(SS-U)核酸檢測試劑盒 48T

豬鏈球菌Ⅱ型(SS-Ⅱ)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬鏈球菌Ⅱ型(SS-Ⅱ)核酸檢測試劑盒 48T

豬弓形蟲(TOX)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬弓形蟲(TOX)核酸檢測試劑盒 48T

布氏桿菌(BS)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

布氏桿菌(BS)核酸檢測試劑盒 48T

豬肺炎支原體(MHP)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬肺炎支原體(MHP)核酸檢測試劑盒 48T

西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

西尼羅河病毒(WNV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

豬托克特諾病毒(TTV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬托克特諾病毒(TTV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

豬腦心肌炎病毒(EMCV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬腦心肌炎病毒(EMCV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

豬戊型肝炎病毒(HEV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬戊型肝炎病毒(HEV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬流行性腹瀉病毒(PEDV)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

小鼠肝實質細胞豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

豬流感病毒通用型(SIV-U) 核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T

產品名稱 規格

馬流感病毒H3N8型(EIV-H3N8)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

馬流感病毒H3N8型(EIV-H3N8)核酸檢測試劑盒(RT-PCR法) 48T